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菌种保存方法的简单介绍


 菌种保藏是微生物学工作者的重要研究手段之一,其目的是把菌株的原始性状和优良性状保存下来,防止死亡、退化或杂菌污染。菌种保藏方法很多,现简单介绍几种:

 

  1.低温保藏法

 

  固体斜面抱子,液体抱子,麸皮,大米,小米或玉米粉等材料制备的抱子等,都可用4℃左右低温冰箱保存,时间在30~60天(根据菌种稳定性而定),也可在棉塞上浸蜡,一般可达3~4个月,至半年之久。

 

  2.低温定期移植保存法

 

  这是一种经典的简易保存法,即菌种接种于所要求的斜面培养基上,置最适温度下培养,至所需要的发育阶段后,置于低温,干燥处保存,每隔3~6个月移植培养一次(具体视菌种特性而定)。

  除斜面定期移植外,还有穿刺培养定期移植法,对大肠杆菌,极毛芽抱杆菌效果良好,穿刺培养基琼脂的含量比常用量少1/2(约0.6 %~0.8%)。

 

  3.液体石蜡法

 

   选用优质纯净的液体石蜡,经121℃高压灭菌2 h,然后170℃干热处理1~2 h,以除水分,冷却后加到斜面上,覆盖以超过斜面为宜。菌种用的试管塞为橡皮塞,并用蜡封上,放阴凉室温处即可。

 

  4.砂土保藏法

 

  (1)砂土载体准备:将黄砂用自来水浸泡洗涤数次,使pH为中性,然后滤出烤干,用60目钢丝筛除去粗粒备用,同时采用贫痔的深挖lm以下的土,自来水浸泡洗涤数次使pH中性,待沉淀后,弃去上清液,烤干后辗末,120目过筛,将上述砂和土以1:1混合,装入1.2 cm X lO cm安培管中,装量为试管1/7左右,塞好棉塞,120℃高压灭菌1 h,间歇灭菌5~6次,烤干备用。

  (2)菌种准备:取生长良好、孢子丰富的新鲜斜面。需纯菌,加灭菌蒸熘水2~2.5 ml,轻轻刮下孢子,吸0.2~0.3 ml到灭菌备用的沙土中,真空干燥4~6 h,低温4℃保存。适用于产芽孢的细菌、放线菌和真菌、可保藏5~7年。

 

  5.冷冻干燥法

 

  这是菌种保藏比较理想的一种方法,适用千多种细菌和放线菌。在多数情况下,也适用于真菌、酵母、病毒、噬菌体、立克次氏体。它具有变异少,保藏时间长,输送贮存方便之优点。

 

  6.液氮超低温保藏法

 

  (1)材料:液氮冰箱或液氮法。

     优质玻璃瓶安瓿管(规格7.5mm X 10mm)

     液氮

 

  (2)方法:将欲保藏的菌种悬液或菌块(常用保护剂为10%甘油或5%~10%二甲基亚枫)密封于安瓿瓶内,先经控制致冷速度,预冻后,贮藏于-l5O℃至-196℃液氮冰箱中保存,保存期间需注意及时补充液氮。需恢复培养时,取出安瓶管急速放35~40℃温水中,使其迅速融化后,打开,移种。这是一种保藏菌种的好方法,国外已广泛使用。

  本文节选自《常见细菌系统鉴定手册》第十七章。



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