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一些新手在菌落总数检测过程中的问题锦囊


一、菌落总数的问题(是一些新手问的问题)

1.有新人可能会拿着菌落总数的平板去问别人这是什么菌?
答:这是看不出来的,菌落总数只能检测出样品卫生情况,一个样品的细菌数量,不能验证出什么菌。这是一个不应该犯的误区。
2.若所有稀释度的平板菌落数均不在 30CFU~300CFU 之间,其中一部分小于 30CFU 或大于300CFU 时。就会有人不知道怎么去判定那个梯度更接近30-300。
举例:一个梯度:28/28;另梯度:305/305,那么那个数据更接近呢?
两个方法(网友提供):
a、按标准字面意思直接做差比较后再乘以稀释倍数:28-30=-2,他们相差2;305-300=5,他们相差5。2比5要小,那么采取28相应的梯度再乘以稀释倍数;
b、恢复为同稀释度做差比较:把两个梯度换算成同一个梯度,一般把28换算成280。280-300=-20,相差20;305-300=5,相差5。20比5要大,那么采取305相应的梯度。
(个人意见:我是更偏向于第二种,因为要在同一个梯度上做比较才能体现出数据的可靠性,同时我偏向采用前一个梯度的数字,那么这个数值可以减少一步步骤带来的误差,数据可能更加接近样品的情况)
3.有时候会出现这么一个情况,最低稀释梯度中一个平板出现1个菌落,另一个无菌落生长。那么结果怎么出呢?
答:(以固态为例子)在过去也有讨论过,有人认为报告写5,也有认为报告写<10(比较两个平板均无菌落生长的时候报<10)这个两个报告方法其实也是可以采用。(我是采用第一种;个人理解不长报告<10,那么长了也报<10吗?不太合理)
4.在做菌落总数的时候,有时候会样品和菌落分不清的(老前辈不会这样),那么如何区分两种物质呢?
答:在培养基中添加TTC(一般2%浓度1mL加到400mL的培养基中,TTC的浓度不要过高,会有抑制作用)。TTC的原理:TTC和活细胞线粒体内的琥珀酸脱氢酶反应,生成红色的甲月赞。那么生长的菌落会变成红色,这样就可以区分菌落与样品。
还有一个方法:4℃冷藏保存一个样品和培养基混匀的平板做对照,观察菌落的形态特征,老前辈们基本靠这个去区分的。
5、菌落总数计数包括霉菌吗?
答:菌落总数的概念是这么规定的,食品检样经过处理,在一定条件下(如培养基、培养温度、培养时间等)培养后,所得每g(mL)检样中形成的微生物菌落总数。所以也包括在PCA上生长的霉菌和酵母等微生物。
6、培养基温度不好控制?
答:前提是培养基灭菌好了放在水浴锅内保温46摄氏度。使用时一个同事在外面把培养基从水浴锅拿到传递窗,培养基表面喷酒精杀菌,然后开启传递窗的紫外灯5min(这一步是对培养基表面杀菌,减少对洁净房的污染)。里面的同事5min之后拿起来放在手心人体不觉烫手,这样的温度最佳倒平板。(注意:倒平板的速度要快,一次最好只拿一瓶,避免培养基凝固)
7、有些朋友不理解菌落总数的单位CFU的意思。
答:CFU为Colony-Forming Units英文缩写,其含义是形成菌落的菌落个数,不等于细菌个数。(比如两个相同的细菌靠得很近或贴在一起,那么经过培养这两个细菌将会形成一个菌落,此时就是2个细菌,1CFU)。菌落总数往往采用的是平板计数法,经过培养后我们数出平板上所生长出的菌落个数,从而计算出每毫升或每克待检样品中可以培养出多少个菌落,于是以CFU/ml或CFU/g报告之。
8、菌落超标的危害。
答:食品的菌落总数严重超标,说明其产品的卫生状况达不到基本的卫生要求,将会破坏食品的营养成分,加速食品的腐败变质,使食品失去食用价值。消费者食用微生物超标严重的食品,很容易患痢疾等肠道疾病,可能引起呕吐、腹泻等症状,危害人体健康安全。
但需要强调的是,菌落总数和致病菌有本质区别,菌落总数包括致病菌和有益菌,对人体有损害的主要是其中的致病菌,这些病菌会破坏肠道里正常的菌落环境,一部分可能在肠道被杀灭,一部分会留在身体里引起腹泻、损伤肝脏等身体器官,而有益菌包括酸奶中常被提起的乳酸菌等。但菌落总数超标也意味着致病菌超标的机会增大,增加危害人体健康的几率。
9、培养后的培养基出现干裂情况。
答:干裂是由于培养基里面的水份缺失导致,所以当出现干裂情况,先要观察干裂平板的数量和位置。看是否是培养箱内部温度不稳定导致(一般平皿一叠可以放置六个,同时要注意每叠之间需要保留一点间隙让其通风);排除仪器的原因之后,看是培养基否倒得太薄(初学者可以拿三角瓶装水进行练习);还有其他原因,其实在出现干裂的情况下,结果是无效的(除非干裂情况不严重)。排查出问题所在,可以避免我们下次再犯错。
10、培养基的配置。
答:培养基的包装上(标准上)都会写着先煮热溶解再分装,那么是不是一定要煮热溶解呢?首先瓶子上的配置方法是直接配置一升的PCA,这里是必须要煮热溶解(防止不均匀,使得部分培养基不凝固)。
其实配置培养基有两个方法:第一个:用一个大容器配置培养基,然后加水煮热溶解(注意搅拌,防止烧焦),待溶解完成之后进行分装(这里需要注意安全),再去灭菌。第二个方法就是使用500mL三角瓶(其他容器也可以)配置300ml的培养基,加水稍微溶解(此步不需要加热),再拿去灭菌。


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