1、结块：
成因：
溶解不充分： 粉末（尤其是琼脂）未完全溶解即开始冷却。
局部过热/烧焦： 加热时未持续搅拌，底部粉末焦化结块。
琼脂质量/预处理： 琼脂本身质量不佳或未充分浸润。
水质问题： 水中矿物质过多（硬水）可能促进沉淀结块。
解决之道：
充分搅拌，分步溶解： 先用部分冷水将粉末调成糊状，再边搅拌边加入剩余水。对于含琼脂的培养基，先溶解其他成分，最后加入琼脂粉，并持续搅拌加热至完全沸腾溶解（琼脂液透明澄清）。
温和均匀加热： 使用水浴锅或电磁炉低功率加热，并持续搅拌（磁力搅拌器尤佳）。
选择优质琼脂： 使用知名品牌的纯净琼脂粉。
使用纯水： 推荐使用蒸馏水、去离子水或超纯水。
2、颜色：
成因：
成分错误/称量不准： 特别是pH指示剂（如酚红）、染料（如结晶紫）或特定营养成分（如牛肉膏、酵母提取物颜色深）。
pH值偏差： pH未正确调整（如过酸或过碱使指示剂颜色异常）。
水质问题： 含杂质或金属离子的水可能导致颜色异常或沉淀。
灭菌影响： 高温高压灭菌可能导致某些成分（如糖类）轻微焦化变黄（尤其灭菌时间过长或培养基过于浓缩时）。
解决之道：
精准称量，仔细核对： 严格按照配方操作，尤其注意微量成分（指示剂、染料）。
校准pH计，准确调pH： 使用校准过的pH计，在灭菌前将pH调整至规定值（灭菌后pH通常会略微下降0.1-0.3）。
坚持使用纯水。
规范灭菌操作： 严格遵守灭菌温度和时间，避免过度灭菌。必要时可对热敏感成分（如某些糖、维生素）单独过滤除菌后加入。
3、菌就是长不好（不长、长势弱、形态异常）：
成因（排除了菌种本身和培养条件问题）：
过度： 高温长时间破坏热敏感营养成分（维生素、生长因子、某些糖类）。
不足： 未能彻底杀灭杂菌，导致污染或营养成分被消耗。
成分错误/缺失/失效： 关键营养物质未添加、添加量不足或已过期失效。
pH值严重偏离： 影响微生物酶活性和营养吸收。
渗透压不适： 盐分或糖浓度过高或过低。
抑制剂残留： 容器清洗剂（如洗涤灵、消毒剂）未冲洗干净，或水中含有抑制物质。
氧化损伤： 某些对氧敏感的培养基成分在配制过程中暴露时间过长。
灭菌过度/不足：
污染： 配制或分装过程中引入杂菌。
解决之道：
核对配方，检查试剂： 确保所有成分正确无误且在有效期内。
精确调pH和渗透压。
彻底清洗容器： 用大量纯水冲洗，避免清洁剂残留。
高效操作，减少暴露： 配制过程尽量迅速，尤其对氧敏感成分。
严格灭菌： 这是关键中的关键！（见下文灭菌要点）。
无菌操作： 整个配制、分装过程严格遵守无菌原则。
灭菌是培养基制备的生命线！最常用的是高压蒸汽灭菌（湿热灭菌）。
1、核心参数：121°C, 15-20分钟： 这是杀死所有微生物（包括最难缠的芽孢）的标准条件。确保灭菌锅能稳定达到并维持此温度和压力（通常对应0.1-0.15 MPa）。
2、彻底排出冷空气： 冷空气的存在会阻碍蒸汽穿透，导致灭菌死角。灭菌锅必须配备有效的排气阀，并在升温阶段充分排气（直至排出纯蒸汽）。
3、装载量适中： 物品（尤其是液体培养基）不要装得太满（不超过容器体积的2/3），容器间留有缝隙，保证蒸汽自由流通。
4、液体体积与灭菌时间： 体积越大，中心达到灭菌温度所需时间越长。通常1L以下液体，15-20分钟足够；更大体积需酌情延长（需验证）。
5、特殊成分特殊处理：
a、含糖培养基： 糖类在高温下易焦化。可采用115°C (0.07 MPa), 15-20分钟灭菌，或对糖溶液单独过滤除菌（0.22 μm滤膜）后加入已灭菌并冷却至约50°C的基础培养基中。
b、热敏感成分（维生素、抗生素、某些生长因子）： 必须采用过滤除菌（0.22 μm滤膜），待基础培养基灭菌并冷却至适宜温度（通常50°C左右）后，在无菌条件下加入并混匀。
6、灭菌后处理：
a、自然降压冷却： 灭菌结束，务必让压力自然降至零后才能打开排气阀和锅盖！急速降压会导致液体剧烈沸腾喷溅甚至容器破裂！
b、及时取出： 冷却后尽快取出培养基，避免在湿热环境中放置过久。
c、斜面/平板制作： 如需倒平板或摆斜面，待培养基冷却至不烫手（约50-55°C），在无菌环境下迅速操作。
配制好的培养基需妥善保存，防止失效或污染。
1、未灭菌干粉/成分：
条件： 密封、干燥、阴凉（通常室温或按说明冷藏）、避光。
注意： 严格遵循产品说明书。易吸湿结块或对温湿度敏感的试剂需干燥器保存或冷藏。注意有效期。
2、已灭菌液体培养基：
短期（1周内）： 可存放于4°C冰箱。使用前需恢复至室温或培养温度，必要时重新混匀。
长期： 建议根据培养基性质，在4°C冰箱密封保存数周至数月（需验证稳定性）。含不稳定成分（如光敏成分）的需严格避光。使用前检查澄清度、颜色、有无沉淀或污染迹象。
3、已灭菌琼脂培养基（未倾倒）：
融化状态： 灭菌后可暂时存放于约50°C水浴中（防止凝固），但不宜超过几小时，以免成分破坏或水分蒸发。尽快倾倒平板或分装。
固体状态： 灭菌后未倾倒的琼脂培养基可密封保存于4°C冰箱。使用时需重新加热融化（避免反复多次熔融），冷却至50°C左右再倾倒平板或摆斜面。
4、倾倒好的平板/斜面：
短期（1-4周）：密封包装（如用封口膜或装入自封袋）后，倒置存放于4°C冰箱。可减少水分蒸发和污染风险。
使用前： 从冰箱取出后，恢复至室温再使用（尤其是培养真菌或对冷凝水敏感的细菌），以减少平板表面的冷凝水。
注意： 平板和斜面均有有效期，通常建议尽快使用。使用前检查有无干裂、污染或过多冷凝水。
通用保存要点：
严格密封： 防止水分蒸发、污染和吸收空气中的CO₂（影响pH）。
清晰标签： 务必标注培养基名称、配制日期、灭菌日期、有效期、配制者等信息。
避光： 对光敏感的培养基（含染料、维生素等）需用锡箔纸包裹或存放于棕色瓶中。
定期检查： 使用前务必检查培养基的物理状态（澄清度、颜色、有无沉淀/结块/干裂）和无菌状况（可抽取部分做无菌试验）。
掌握培养基的配制、灭菌与保存秘籍，是实验成功的坚实后盾。关键在于精确、规范、无菌：精确称量与调pH，规范操作避免结块变色，严格灭菌杜绝污染，妥善保存维持效力。每一次严谨的操作，都是为微生物或细胞的健康生长铺就坦途。祝你在实验室里培养无忧，成果丰硕！
温馨提示：试剂为科研质控使用，不可用于临床及人体！非药用，非食用。