1.细菌非常小：大多数细菌直径在0.5 - 5微米之间。因此，我们必须使用显微镜的油镜（100X物镜） 才能看清其大致形态。
2.分辨率是关键：看清细菌不仅仅是放大，更是要能分辨出它们之间的界限。正确的照明和聚光镜调节是提高分辨率的核心。
3.工作流程：总的原则是 “从低倍到高倍，先粗调后细调”。
第一步：实验前准备
1.清洁：用擦镜纸轻轻擦拭目镜和物镜的镜头。如果镜头上有油渍或指纹，可蘸取少量二甲苯或乙醇乙醚混合液擦拭，最后再用干净擦镜纸擦干。
2.标本制备：确保您的细菌标本已经正确制备。通常是：
涂片 → 干燥 → 固定 → 染色（如简单染色法的亚甲基蓝、结晶紫，或革兰氏染色）。
未经染色的活细菌是透明、几乎看不见的，新手强烈建议从染色标本开始练习。
3.打开光源：打开显微镜电源，将亮度调到中等。
第二步：低倍镜（10X）定位与对焦
这是找到目标区域最关键的一步。
1.放置标本：将染色好的玻片标本固定在载物台上，有菌膜的一面朝上。用标本夹夹紧。
2.物镜转换：旋转物镜转换器，将10倍物镜（标有10X）对准通光孔。你会听到“咔哒”一声，表示到位。
3.调节聚光镜：
将聚光镜升到最高位置。
将孔径光阑（在聚光镜下方，一个可开合的铁圈）开到最大。
4.粗调对焦：
双眼看向目镜，同时用粗准焦螺旋缓慢降低载物台或升高镜筒（取决于显微镜型号），直到视野中出现模糊的图像。
然后使用细准焦螺旋进行微调，直到图像清晰。
5.寻找目标：在低倍镜下，细菌看起来像是密密麻麻的彩色小点（蓝色或紫色）。移动载物台，找到一个细菌分布均匀、密度适中的区域，将其移动到视野中央。
第三步：切换到高倍镜（40X）
1.直接转换：直接从10X物镜切换到40X物镜。
注意：现代显微镜通常是“齐焦”设计的，转换后图像应该大致清晰，只需用细准焦螺旋微调即可看清。
2.调节光照：切换到高倍镜后，视野会变暗。此时可以适当调高光源亮度，并稍微缩小孔径光阑（约开到70%-80%），以增加对比度，使图像更清晰。
第四步：切换到油镜（100X）并滴油——最关键的一步
细菌的形态细节主要在这一步观察。
1.移到中央：在40X物镜下，将你要观察的目标区域精确移动到视野正中央。
2.转开物镜：将40X物镜从通光孔处转开。
3.滴加镜油：在玻片的目标区域上滴一滴香柏油（Immersion Oil）。量不用多，一小滴即可。
4.转换油镜：非常缓慢、小心地将100倍油镜旋转到位。在操作过程中，从侧面观察，让油镜的镜头前端轻轻浸入油滴中，但切勿压到标本玻片！
原理：油镜的孔径非常大，光线从玻片进入空气时会发生全反射，导致光线无法进入物镜。香柏油的折射率与玻璃相近，可以充当介质，使光线顺利进入物镜，从而提高分辨率和亮度。
第五步：油镜的对焦与精细调节
1.仅用细准焦螺旋：
双眼看目镜，极其缓慢地转动细准焦螺旋。通常只需转动很小幅度（可能不到一圈）就能找到清晰的图像。
严禁使用粗准焦螺旋！ 否则极易压碎玻片并损坏昂贵的油镜镜头。
2.优化照明（科勒照明原理）——这是看清细菌的灵魂步骤：
调节聚光镜高度：关闭视野光阑（在镜座上，控制照明范围的那个光圈），你会看到视野边缘出现一个多边形亮斑。缓慢降低聚光镜，直到这个多边形的边缘变得非常清晰锐利。然后，再稍微升高一点点聚光镜，使这个锐利的边缘刚刚消失。此时聚光镜就处于最佳焦平面了。
调节孔径光阑：重新打开视野光阑，使其刚刚超出视野范围。然后，一边看目镜，一边调节孔径光阑。你会发现，开得太大，图像亮但对比度低，细菌发白；关得太小，图像暗且会产生衍射光环。最佳状态是：在保证足够亮度的前提下，稍微关小一点孔径光阑，直到细菌的轮廓和内部细节最分明、对比度最高。
3.观察：此时，你应该能清晰地看到被染色的细菌了。它们可能是：
球菌：像一个个小圆点。
杆菌：像小短棍或小细棍。
弧菌：像弯曲的逗号。
第六步：收尾工作
关闭电源。
擦拭油镜：观察完毕后，先将油镜转开，然后取下标本。立即用擦镜纸擦掉油镜上的香柏油。如果油已干，可用蘸有少量二甲苯的擦镜纸擦拭，并迅速用干擦镜纸再擦一次，以防二甲苯溶解镜头胶。
清洁标本：同样用蘸有二甲苯的擦镜纸擦净玻片上的油。
复位：将物镜转至低倍镜（如4X），降下载物台，将亮度调回最低。
问题：视野一片漆黑？
检查电源、光源亮度。
检查物镜是否完全卡到位。
检查孔径光阑是否关死了。
问题：视野很亮但看不到东西？
大概率是标本上没有细菌，或者对焦没对准。返回低倍镜重新寻找和聚焦。
可能聚光镜位置太高。
问题：能看到模糊的影子但不清？
细菌未染色或染色太浅。
细准焦螺旋没调到最佳位置。
孔径光阑开得太大，这是新手最常见的问题！关小一点试试。
问题：图像边缘有阴影或看起来脏？
可能是目镜或物镜镜头脏了，用擦镜纸清洁。
终极技巧：耐心和微操 调节细准焦螺旋和孔径光阑时，动作一定要慢、要轻柔。好的图像是“微调”出来的。
遵循以上步骤，多加练习，您很快就能熟练地将显微镜调节到最佳状态，清晰地观察到神秘的微生物世界了！祝您实验顺利！
温馨提示：试剂为科研质控使用，不可用于临床及人体！非药用，非食用。