微生物菌种放置时间久了（即长期保藏），如果不采取适当的保藏方法或保藏条件不佳，会产生一系列负面影响，主要可以归纳为以下几点：
1、存活率下降（死亡）：
这是最直接和最普遍的影响。微生物细胞在非生长状态下，其代谢活动并未完全停止，能量和营养物质会逐渐消耗殆尽。
环境压力（如干燥、低温、缺氧）本身也会对细胞造成损伤。
积累的代谢废物可能产生毒性。
最终导致细胞活力逐渐丧失，直至死亡。放置时间越长，活细胞的比例通常越低。
2、菌种退化/变异：
生产能力下降： 对于生产菌（如抗生素、酶、有机酸等），其目标产物的产量可能显著降低甚至丧失。
生长速度改变： 可能变慢或变快。
形态改变： 菌落形态、细胞形态可能发生改变。
生理生化特性改变： 对营养的需求、代谢途径、抗性等可能发生变化。
毒力/致病性改变： 对病原菌或条件致病菌而言，其致病能力可能增强或减弱。
孢子形成能力下降： 对产孢微生物，产孢能力可能减弱。
遗传漂变/自发突变： 即使是在保藏状态下，细胞内的DNA仍可能发生微小的、自发的突变。虽然速度比活跃生长时慢很多，但长时间的积累可能导致菌群中突变株的比例增加。
选择压力： 保藏环境（如培养基成分、温度、缺氧状态）本身构成一种选择压力，可能使那些更适应保藏条件（但不一定具有原始优良特性）的突变株或亚群占据优势。
表型改变： 这些遗传变化最终会导致菌种表型（可观察的特征）发生变化，例如：
3、污染风险增加：
如果保藏容器密封不严或操作过程中无菌技术不到位，放置时间越长，被其他杂菌（细菌、霉菌、酵母等）或噬菌体污染的风险就越高。一旦污染，原始菌种就可能被破坏或混杂。
4、复苏困难：
长期处于休眠或损伤状态的细胞，重新转移到适宜生长条件时，可能难以“苏醒”或生长非常缓慢。需要特殊的复苏手段或更长的适应时间。
保藏方法对长期放置效果的影响至关重要：
不恰当的短期方法（如斜面传代、液体石蜡封存、普通冰箱4℃保存）：
这些方法只能维持相对较短的时间（几周到几个月）。
频繁传代（斜面传代法）大大增加了退化、变异和污染的风险，是导致菌种退化的主要原因之一。
放置时间稍长，存活率就会急剧下降，变异风险很高。
长期保藏方法（如冷冻干燥/冻干、超低温冷冻-80℃/-196℃液氮、甘油管冷冻）：
这些方法通过极大地降低代谢速率（深度冷冻）或创造接近无水的状态（冻干）来长期维持菌种稳定性。
效果显著： 在严格操作和适宜条件下，可以保藏数年、数十年甚至更久。
大幅降低变异风险： 代谢活动几近停止，自发突变和选择压力大大减小。
保持特性稳定： 是工业菌种库和标准菌种保藏中心（如ATCC, DSMZ, CICC等）采用的标准方法。
仍需注意： 即使是最好的方法，也不能保证100%不变异或零死亡，只是风险降到非常低。复苏过程也需要规范操作。
总结与建议：
放置时间越长，风险越高： 死亡、退化变异、污染的可能性都随之增加。
保藏方法是关键： 对于需要长期保存的菌种，必须采用可靠的长期保藏方法（冻干、超低温冷冻），并严格遵守操作规程。
定期复壮与检查： 即使采用长期方法，也应定期（如每年或根据保藏中心建议）复苏菌种，检查其存活率、纯度和关键特性（如生产能力、形态、生化特性等），必要时进行复壮（通过平板划线等方法筛选具有原始优良性状的单菌落）。
减少传代次数： 尽量避免不必要的传代，传代是导致退化的主要人为因素。长期保藏的核心目的之一就是减少传代次数。
详细记录： 对保藏日期、方法、代数、位置、复苏及检测结果等进行详细记录。
因此，为了确保微生物菌种的活力、纯度和遗传稳定性，避免因长期放置带来的负面影响，选择合适的、标准的长期保藏方法并实施规范的管理至关重要。
温馨提示：试剂为科研质控使用，不可用于临床及人体！非药用，非食用。