从“菌种”到“工作菌株”：实验室菌种传代的规范流程！

从“菌种”到“工作菌株”的传代过程在微生物实验室中具有严格的操作规范和管理要求，目的是确保菌株活性、纯度、遗传稳定性及可追溯性。以下是依据现行标准（截至2025年底）整理的规范流程：

一、基本概念区分

• 原始标准菌株（第0代）：由权威保藏机构（如ATCC、CMCC、CGMCC等）提供，通常以冻干或超低温形式保存。
• 储备菌株（第1代）：由标准菌株首次活化后制备并冷冻保存，用于后续传代。
• 工作菌株（第2–4代）：由储备菌株传代获得，用于日常实验或质量控制，传代次数不得超过5代（依据《药品微生物实验室质量管理指导原则》9203）。

⚠️ 超过5代可能导致遗传漂变、表型改变或丧失标准特性。文章源自：微生物菌种网https://www.junzhucn.com微生物菌种网-https://www.junzhucn.com/weishengwu/zhishi/802.html

二、传代前准备

1. 物料平衡
   
   新购菌种或灭菌后的琼脂斜面需在室温下平衡30分钟，避免温差导致冷凝水污染。
2. 人员防护
   
   更换专用洁净服，佩戴N95口罩、无菌手套；
   使用消毒液彻底清洁双手；
   在阳性操作室或生物安全柜内操作。

三、标准传代操作流程

步骤1：活化（第0代 → 第1代）

• 从冻存管（如-80℃甘油管或冻干管）中取菌；
• 接种至非选择性固体培养基（如营养琼脂斜面或平板）；
• 适宜温度培养（如35±1℃，18–24小时）；
• 获得第1代储备菌株，部分用于保存，部分用于下一轮传代。

步骤2：传代培养（第1代 → 第2–4代工作菌株）

常用方法包括：文章源自：微生物菌种网https://www.junzhucn.com微生物菌种网-https://www.junzhucn.com/weishengwu/zhishi/802.html

所有工具（接种环、针、移液器吸头等）必须无菌，使用前后灼烧或更换。文章源自：微生物菌种网https://www.junzhucn.com微生物菌种网-https://www.junzhucn.com/weishengwu/zhishi/802.html

四、记录与标识

每支菌株必须标注并记录以下信息：文章源自：微生物菌种网https://www.junzhucn.com微生物菌种网-https://www.junzhucn.com/weishengwu/zhishi/802.html

• 菌种名称（含属、种、保藏编号，如 E. coli ATCC 25922）
• 传代日期
• 当前代数（如P2、P3）
• 培养基类型与培养条件（温度、时间、需氧/厌氧）
• 保藏位置（冰箱编号、冻存盒位置）
• 操作人签名

建议使用电子或纸质《菌种传代与使用记录表》，实现全程可追溯。文章源自：微生物菌种网https://www.junzhucn.com微生物菌种网-https://www.junzhucn.com/weishengwu/zhishi/802.html

五、保存与销毁

• 短期保存：斜面4–6℃，保存数周至数月，需定期转接；
• 长期保存：甘油管（-80℃）、冷冻干燥、液氮等；
• 销毁：污染或超代菌株需经121℃高压灭菌30分钟以上后废弃。

六、关键法规依据（截至2025年）

• 《中国药典》通则9203《药品微生物实验室质量管理指导原则》
• 《微生物实验室菌株管理全流程规范》
• ISO 11133:2014（培养基质量控制）
• 各保藏中心（ATCC/CGMCC等）提供的说明书

总结：
从原始菌种到工作菌株，核心在于控制代数、防止污染、规范操作、完整记录。只有严格遵循标准化流程，才能确保实验结果的可靠性与合规性。文章源自：微生物菌种网https://www.junzhucn.com微生物菌种网-https://www.junzhucn.com/weishengwu/zhishi/802.html 文章源自：微生物菌种网https://www.junzhucn.com微生物菌种网-https://www.junzhucn.com/weishengwu/zhishi/802.html