lb培养基的配方及制作过程

LB培养基是一种常用的细菌培养基，特别适用于培养基因工程受体菌（如大肠杆菌）等微生物。以下是LB培养基的配方及制作过程： ### 一、LB培养基的配方 * 胰蛋白胨（Tryptone）：10克 * 酵母提取物（Yeast Extract）：5克 * 氯化钠（NaCl）：10克 * 蒸馏水或去离子水：1升 若需配置固体培养基，则还需加入琼脂粉： * 琼脂粉（Agar）：15克（可根据需要调整至15~20克） 此外，根据实验需要，还可以加入适量的抗生素，如氨苄青霉素（Amp）、卡那霉素（Kan）等。 ### 二、LB培养基的制作过程 1. **材料准备**：准备好胰蛋白胨、酵母提取物、氯化钠、蒸馏水（或去离子水）、琼脂粉（如需配置固体培养基）、抗生素（如需）以及锥形瓶、烧杯、玻璃棒、容量瓶、移液器、天平、高压蒸汽灭菌锅、培养皿、封口膜等实验器材。 2. **称量**：使用天平准确称量胰蛋白胨10克、酵母提取物5克、氯化钠10克。若需配置固体培养基，则还需称量适量的琼脂粉。 3. **溶解**：在烧杯中加入约800毫升的蒸馏水（或去离子水），然后依次加入称量好的胰蛋白胨、酵母提取物和氯化钠。用玻璃棒搅拌，直至所有成分完全溶解。 4. **调pH值**：使用氢氧化钠（NaOH）溶液调节溶液的pH值至7.0~7.5之间。通常使用5mol/L的NaOH溶液逐滴加入，同时用pH计监测，直至达到所需的pH值。 5. **定容**：将溶液转移到容量瓶中，或使用玻璃棒引流到合适的容器中。加水定容至1升。 6. **加琼脂**：若需配置固体培养基，则在此步骤中加入称量好的琼脂粉。加热并搅拌，直至琼脂粉完全溶解。 7. **分装**：若需配置液体培养基，则将其分装到锥形瓶或其他合适的容器中。若配置的是固体培养基，则无需分装，直接进行下一步。 8. **灭菌**：将培养基放入高压蒸汽灭菌锅中，在121℃下灭菌15~20分钟。 9. **冷却与加抗生素**：灭菌完成后，将固体培养基取出，放置在55℃左右的水浴中冷却。待培养基冷却至适宜温度时，加入适量的抗生素（如需要），并充分摇匀。注意抗生素应在培养基冷却到适宜温度后加入，以防止高温破坏抗生素活性。 10. **倒平板**：将固体培养基迅速倒入无菌培养皿中，每皿倒入约10~15毫升。轻轻摇晃培养皿，使培养基分布均匀。待培养基凝固后，用封口膜封好培养皿边缘。 11. **保存**：液体培养基冷却后，可储存在4℃的冰箱中备用。固体培养基凝固后，倒置放在4℃的环境中保存，确保在一个月内使用完毕。 ### 三、注意事项 1. **无菌操作**：在整个配制过程中，应严格遵守无菌操作规程，避免细菌污染。 2. **pH值调节**：pH值对细菌的生长有显著影响，应准确调节至适宜范围。 3. **培养基凝固情况**：在进行倒平板操作时，要注意培养基的温度，避免培养基凝固过快或过慢影响倒板质量。 以上就是LB培养基的配方及制作过程。如果你还有其他问题或需要进一步的帮助，请随时告诉我。 文章源自：微生物菌种网https://www.junzhucn.com微生物菌种网-https://www.junzhucn.com/weishengwu/zhishi/590.html