菌种长期保存有什么方法？

菌种长期保存有不少实用方法，下面为你详细介绍几种常见的： ### 液氮超低温保藏法 - **原理**：利用液氮超低温（ -196℃）的环境，让菌种细胞内的代谢活动几乎停止，从而达到长期保存的目的。在这个温度下，细胞内的化学反应速率极低，能有效减少菌种的变异和死亡。 - **操作步骤** 1. **准备菌种**：挑选处于对数生长期的菌种，这种状态的菌种细胞活力强，保存后复苏率高。将其制备成高浓度的细胞悬液，一般细胞浓度要达到一定标准，比如细菌可能要求每毫升含数亿个细胞。 2. **添加保护剂**：向细胞悬液中加入适量的保护剂，常用的有二甲基亚砜（DMSO）、甘油等。保护剂的作用是在冷冻过程中防止细胞内形成冰晶，因为冰晶会破坏细胞结构，导致菌种死亡。例如，使用甘油作为保护剂时，通常将其与细胞悬液按一定比例混合，使甘油的最终浓度在10% - 20%左右。 3. **分装与冷冻**：将加入保护剂的细胞悬液分装到小安瓿瓶或冻存管中，每管装量不宜过多，一般0.5 - 1毫升即可。然后将装有菌种的容器先放入 -20℃或 -80℃的冰箱中预冷冻一段时间，让菌种逐渐适应低温环境，减少细胞损伤，最后再放入液氮罐中保存。 - **优点**：保存时间长，理论上可以无限期保存；菌种的遗传稳定性好，变异率低。 - **缺点**：需要专门的液氮罐等设备，成本较高；操作过程相对复杂，需要专业人员进行操作。 ### 甘油冷冻保藏法 - **原理**：甘油可以降低水的冰点，在冷冻过程中，甘油能使细胞内的水分形成玻璃态而非冰晶态，从而保护细胞免受冰晶损伤，维持菌种的活性。 - **操作步骤** 1. **制备菌种悬液**：取对数生长期的菌种，用无菌生理盐水或相应的培养基制成细胞悬液。 2. **加入甘油**：向细胞悬液中加入无菌甘油，使甘油的最终浓度达到15% - 30%。例如，对于细菌菌种，可以将等体积的菌液和30%的甘油溶液混合，得到甘油终浓度为15%的保存液。 3. **分装与冷冻**：将混合好的菌种保存液分装到无菌的冻存管中，每管装1 - 2毫升。然后将冻存管放入 -20℃或 -80℃的冰箱中保存。 - **优点**：操作相对简单，不需要特殊的设备，成本较低；保存效果较好，一般可以保存数年。 - **缺点**：保存时间相对液氮超低温保藏法较短；在反复冻融过程中，菌种的活性可能会受到一定影响。 ### 真空冷冻干燥保藏法 - **原理**：先将菌种悬液快速冷冻，然后在真空环境下使冰直接升华成水蒸气，从而得到干燥的菌种制品。干燥后的菌种处于休眠状态，代谢活动极低，可以在常温下长期保存。 - **操作步骤** 1. **制备菌种悬液**：选择对数生长期的菌种，用适宜的培养基制成高浓度的细胞悬液。 2. **预冷冻**：将菌种悬液分装到安瓿瓶中，每瓶装量根据菌种类型和安瓿瓶大小而定，一般0.1 - 0.5毫升。然后将安瓿瓶放入快速冷冻装置中，在 -30℃ - -50℃的温度下快速冷冻，使菌种悬液迅速形成冰晶。 3. **真空干燥**：将冷冻好的安瓿瓶连接到真空冷冻干燥机上，在真空环境下进行干燥。干燥过程中，冰晶直接升华成水蒸气，留下干燥的菌种粉末。干燥时间根据菌种和装量而定，一般需要数小时到数十小时。 4. **封口保存**：干燥完成后，在真空状态下将安瓿瓶熔封，然后放在干燥器中，于4℃或室温下保存。 - **优点**：保存时间长，一般可以保存10年以上；菌种的活性高，复苏率高；便于运输和分发。 - **缺点**：设备昂贵，操作复杂，需要专业人员进行操作；干燥过程中可能会对菌种造成一定的损伤。 你还有其他关于菌种保存的问题吗？ 文章源自：微生物菌种网https://www.junzhucn.com微生物菌种网-https://www.junzhucn.com/weishengwu/zhishi/650.html